NLCM纯化的不同分化程度贲门腺癌细胞差异蛋白质组学研究

摘要

目的 联合导向激光捕获显微切割技术(NLCM)及蛋白质组学技术比较分析高分化贲门腺癌细胞和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱差异,寻找与贲门腺癌恶性程度和预后有关的分子标志物.方法 应用导向激光捕获显微切割技术分别获取高分化和低分化贲门腺癌细胞,提取蛋白质,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,选定差异点,胶内酶解后,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDL-TOF MS)鉴定差异蛋白质,并用免疫组化方法验证差异蛋白的表达.结果 ①NLCM分别分离纯化了高分化和低分化贲门腺癌细胞;②建立了高分化和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱,两组分别检测到(846±52)个和(923±84)个蛋白质点,两组的匹配率为85.4％;③对高分化和低分化的贲门腺癌蛋白质表达谱进行比较分析,鉴定出10种差异蛋白,其中6个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达上调,4个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达下调;④差异蛋白质涉及细胞间信号转导、细胞代谢、凋亡及迁移等;⑤进一步通过免疫组化方法验证了差异蛋白HSP27的表达与蛋白质组学研究结果一致.结论 高分化和低分化贲门腺癌间存在蛋白质表达的差异,这些差异表达的蛋白质可能与贲门腺癌的恶性程度和预后有关.