不同分化程度胃癌细胞差异蛋白质组学研究

摘要

背景与目的：据2002年WHO全球常见肿瘤评估报告，胃癌是全球第四位常见肿瘤，存我国其发病率居恶性肿瘤之首。它极大的威胁着人民群众的身体健康。所以国家非常重视胃癌的防治研究。胃癌的发展是一个渐进的过程，从正常的人胃黏膜上皮细胞到最终的胃癌细胞经历了多个步骤。从不同分化阶段的人胃黏膜上皮组织(包括正常、高分化、中分化、低分化肿瘤组织)取材，并通过一定方法使其永生化，就产生了现有的不同分化程度的胃癌细胞系。将它们按照分化程度排列就形成了胃黏膜细胞从正常到癌变的断面图。因此，通过对这些胃癌细胞的研究，就可以观察到蛋白质组的动态变化，从中找出不同阶段胃癌细胞的差异蛋白质，并阐明这些差异表达蛋白质的变化与胃癌发生发展不同阶段的相互关系及其规律，就能为胃癌的筛查和早期诊断打下基础。 本研究拟以正常人胃黏膜上皮细胞系和不同分化程度的胃癌细胞系为研究对象，采用双向凝胶电泳技术分离细胞可溶性总蛋白，建立不同细胞系的蛋白质表达谱，并分析比较，发现差异表达蛋白质，然后对这些蛋白质进行质谱分析和生物信息学分析。由此确定的胃癌中特异表达的蛋白质，可进一步研究其在胃癌发生、发展中的作用，并探讨是否可作为胃癌诊断治疗的标志物。 材料与方法：选取SV40转化的正常人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)，高分化胃癌细胞系AGS，中分化胃癌细胞系SGC-7901，低分化胃癌细胞系MGc80-3和BGC-823作为研究对象，体外培养，收集细胞，并分别提取其可溶性总蛋白。采用双向凝胶电泳分离正常胃黏膜上皮细胞系和胃癌细胞系可溶性总蛋白，银染色，ImageMaster2DPlatinum软件进行图象分析，得到差异表达的蛋白质点，并切取这些蛋白质斑点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDITOF-TOF)分析获取肽质量指纹图谱(PMF)，Mascot软件搜索NCBInr数据库鉴定蛋白质。 结果：获得重复性和分辨率较好的正常及不同分化程度胃癌细胞系的双向凝胶电泳图谱；在正常胃黏膜细胞系和胃癌细胞系中发现88个差异表达蛋白质，其中22个得到鉴定，在胃癌细胞系中高表达的6个蛋白分别是：DEAD/H盒，二氢硫辛酰胺脱氢酶，转移诱导基因10蛋白，成帽蛋白，电子转移黄素蛋白，热休克蛋白60；只出现在胃癌细胞系中的有3个蛋白，分别是异质核核蛋白A1，重组血红素，异质核核蛋白A2/B1；相反，在胃癌细胞系中低表达的10个蛋白质为KH型剪切调控蛋白，GDP解离抑制因子，翻译起始因子4C，异质核核蛋白K，PDZ和LIM结构域，氯离子通道蛋白，肌酸激酶，乙二醛酶，ATP合成酶；只出现在正常胃黏膜细胞系中的3个蛋白质为SNW1，组织蛋白酶D，泛激素羧基端水解酶L1。 结论：(1)获得重复性和分辨率较好的正常胃黏膜上皮细胞系和胃癌细胞系的双向凝胶电泳图谱；(2)发现了88个差异表达蛋白质，质谱鉴定最后确定了22种和胃癌相关的蛋白质。(3)这些蛋白质可能和胃癌细胞的生长、增殖、分化、转移、致癌过程、信号转导、细胞捌亡等过程相关。

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文摘

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材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

蛋白质组学在胃癌标志物研究中的应用

致谢

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