DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

摘要

目的 探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖.方法 通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化.结果 视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05).转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNA-DNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05).干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05).逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05).结论 在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖.