鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立

摘要

【目的】建立可同时检测鸭坦布苏病毒（Duck tembusu virus,DTMUV）与鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑。【方法】根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR。【结果】优化后的二重RT-PCR反应体系为：2×PCR Mix 12.5μL,其中DTMUV上、下引物各0.5μL,DPV上、下引物各0.5μL,混合模板2.0μL,ddH2O补足至25.0μL;最佳反应程序：95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃1 min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min。该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感。【结论】建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断。