鸡PTH基因克隆、序列测定及其真核表达质粒的构建

摘要

采集200日龄产蛋期新扬州鸡甲状旁腺组织,提取RNA并进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR).扩增产物进行T-A克隆、测序.序列测定结果表明:PTH cDNA核苷酸长度为360bp.与GenBank上发表的鸡序列比较,核苷酸同源性为99.6%,在第159位处存在C-A的有意义突变.与从GenBank下载读取的牛、马、人、狗、猫、食蟹猴PTH基因序列进行比较分析,同源性分别为51-4%、50.8%、50.6%、50.3%、50.3%和46.9%.将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4,构建重组质粒pCEP4-PTH,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为利用pCEP4-PTH调控机体钙代谢、改善蛋鸡生产性能和蛋壳质量的研究应用奠定了基础.