鸡降钙素基因克隆及其真核表达质粒的构建

摘要

采集200日龄新扬州产蛋鸡腮后腺组织,直接提取总RNA,进行反转录一聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物进行克隆、测序,获得新扬州鸡降钙素(CT)基因序列.测序表明,CT基因核苷酸长度为417 bp,编码139个氨基酸.与GenBank上发表序列相比较,核苷酸同源性为99.8%,在第135位处存在G→C的有义突变.与从GenBank下载读取的红点鲑、大马哈鱼、河豚、斑马鱼、人、家鼠、绵羊、犬8个物种序列进行比较分析,核苷酸同源性分别为74.0%、63.3%、59.5%、55.6%、52.8%、50.6%、48%及42.2%.将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4,构建重组质粒pCEP4-CT,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段且连接、构建正确,为利用pCEP4-CT调控机体骨钙代谢、防治蛋鸡骨质疏松症的研究和应用奠定了基础.