鸡CaBP-D28k基因克隆、序列测定及其真核表达质粒的构建

摘要

采集200日龄产蛋新扬州鸡小肠组织直接提取总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行克隆、测序,获得了新扬州鸡CaBP-D28k基因序列.序列测定表明,CaBP-D28k基因核苷酸长度为789bp,编码262个氨基酸.与GenBank上发表序列(NM_205513.1)比较,核苷酸同源性为99.9%,在760 bp处存在G→T的错义突变.与从GenBank下载的马、人、小家鼠、蟾蜍序列进行比较分析,核苷酸同源性分别为79.3%、79.1%、77.4%、77.3%.将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4,构建重组质粒pCEP4-CaBP-D28k,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为利用pCEP4-CaBP-D28k调控蛋禽钙代谢、改善蛋壳质量的研究应用奠定了基础.