弓形虫真核表达质粒pcDNA3/ GRA1的构建及序列测定

摘要

目的:构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)真核表达质粒,为进一步开展DNA疫苗的保护性研究打下基础.方法:采用PCR扩增出编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切,将GRA1定向克隆到pcDNA3 EcoRⅠ/XhoⅠ位点;对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定.结果:特异扩增出预计的GRA1片段,大小为573 bp;扩增产物双酶切后成功连接到pcDNA3中,经PCR,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有GRA1读框.结论:成功构建弓形虫GRA1真核表达质粒.