IL-22基因克隆及其真核表达质粒pcDNA3/hIL-22的构建

摘要

目的克隆人白细胞介素-22(human interleukin-22,hIL-22)基因及构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-22.方法从人外周血分离淋巴细胞,加刀豆蛋白A培养;提取总RNA,进行逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增;获得目的基因片段后,与pGEM-T载体连接成pGEM-T/hIL-22,转化大肠杆菌E.coli-DH5a大量繁殖后,提取质粒DNA,酶切鉴定、测序.用BamH1和Xho1将目的片段从pGEM-T/IL-22切下,与pcDNA3连接成pcDNA3/hIL-22,转化大肠杆菌E.coli-DH5a大量繁殖后,提取质粒DNA,酶切鉴定.结果pGEM/hIL-22内插入片段序列与hIL-22基因序列完全一致;pcDNA3/hIL-22经酶切鉴定与预期结果一致.结论本实验成功完成了hIL-22基因克隆和pcDNA3/hIL-22真核表达载体的构建.