SIRT1对LPS诱导的坏死性小肠结肠炎小鼠模型的保护作用

摘要

目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的坏死性小肠结肠炎(NEC)小鼠的保护作用. 方法3-4日龄C57 BL/6小鼠60只被随机分为三组.对照组大鼠与母鼠同笼,鼠乳喂养,不做任何处理;NEC模型组、SIRT1激动剂干预组大鼠出生24 h与母鼠分开,置于保育箱中,采用鼠乳代用品人工饲养,采用低温缺氧诱导NEC模型.模型制备结束后空腹12 h,处死小鼠采集十二指肠下端至回盲部肠管,观察肠管的弹性、色泽及肠腔有无积气、出血、坏死等病变;HE染色观察肠组织病理变化;ELISA测定肠组织IL-6、IL-10、TNF-α水平;qRT-PCR法检测IL-6、IL-10、TNF-α mR-NA表达水平;Western blot检测肠组织SIRT1蛋白表达水平. 结果模型组小鼠均出现不同程度的腹胀、排黄绿色稀便、嗜睡、胃滞留、呼吸急促等症状,SIRT1激动剂干预组小鼠各症状较模型组减轻,对照组小鼠无异常情况,模型组死亡7只,干预组无死亡.肠组织病理切片显示,对照组肠道上皮及肠绒毛完整,无血管扩张,模型组黏膜下层出血明显、水肿,黏膜下层和固有层分离,肠绒毛结构不完整,部分脱落、坏死,干预组较模型组损伤较轻.Western blot检测显示,与对照组比较,模型组、干预组小鼠肠组织SIRT1表达显著降低(P＜0.05),与模型组比较,SIRT1激动剂干预组SIRT1水平显著升高(P＜0.05).ELISA检测显示,与对照组比较,模型组肠组织中IL-6、TNF-α水平显著升高,IL-10水平显著降低(P＜0.05);与模型组比较,干预组肠组织中IL-6、TNF-α、IL-1β水平显著降低,IL-10水平显著升高(P＜0.05).qRT-PCR验证结果显示,模型组肠组织中IL-6、TNF-α mRNA水平较对照组显著升高,IL-10 mRNA水平显著降低(P＜0.05);与模型组比较,干预组肠组织中IL-6、TNF-α mRNA水平显著降低,IL-10 mRNA水平显著升高(P＜0.05). 结论SIRT1在LPS诱导的坏死性小肠结肠炎小鼠肠内表达水平降低,SIRT1激动剂干预后其表达水平升高,其可能通过抑制炎症反应保护肠道组织完整.