丁苯酞对LPS腹腔注射诱导帕金森病小鼠模型的保护作用

摘要

目的：
　　1.采用腹腔注射LPS法诱导C57BL/6小鼠帕金森病模型，从病因学角度模拟帕金森病自然发病过程；2.探讨丁苯酞对该模型小鼠的神经保护作用及可能机制。
　　方法：
　　将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组（Control）、模型组（LPS）、治疗组（LPS+NBP）。模型组给予单次腹腔注射LPS（5mg/kg）诱导帕金森病模型；治疗组在建模的同时（具体步骤同模型组）给予丁苯酞（120mg/kg，溶于1ml植物油）灌胃治疗，每天一次，持续30天；空白对照组在对应的时间给予相等体积生理盐水腹腔注射。1.分别于实验开始后的第30天、第90天、第150天和第210天，在空白组与模型组各随机取出6只小鼠，采用转棒实验及旷场试验评估小鼠行为变化情况，完成行为学观测后麻醉小鼠，心脏固定液灌流，取脑组织，免疫组织化学染色法观察小鼠黒质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞、IBA-1阳性细胞（活化的小胶质细胞）数目的变化，观察炎性因子IL-1β的表达情况。2.分别于实验开始后的第210天，取空白组、模型组、治疗组每组各6只小鼠行转棒实验及旷场实验，完成行为学观察后麻醉小鼠，每组取三只小鼠心脏固定液灌流，取脑组织，免疫组织化学染色法观察小鼠黒质TH、IBA-1、IL-1β、CHOP的表达情况，另三只小鼠取中脑黒质部位，用蛋白质印迹法（Western blot）测定P-JNK、P-P38及P-ERK的表达水平的。
　　结果：
　　1.单次LPS腹腔注射能够能诱发C57BL/6小鼠行为学障碍：与对照组相比，模型组小鼠的运动能力在第30天并未表现出明显变化(P>0.01)，但从第90天起模型组小鼠表现出明显的运动能力下降（P<0.01），差异有统计学意义，并逐渐表现出震颤、竖毛等PD症状，模型组小鼠提前出现毛色变白、胡须脱落等老化现象。
　　2.单次LPS腹腔注射能够诱发C57BL/6小鼠长期脑内炎症反应:与对照组相比， 模型组小鼠中脑黑质区IBA-1、IL-1β阳性细胞数明显增多（P<0.01），差异有统计学意义。
　　3.单次LPS腹腔注射能够诱发C57BL/6小鼠多巴胺能神经元丢失：与对照组相比，模型组小鼠中脑黑质区TH阳性神经元细胞树突减少，细胞染色变浅，细胞数目明显下降（P<0.01），差异有统计学意义。
　　4.丁苯酞可以缓解帕金森病模型小鼠的行为学障碍：与模型组相比，治疗组小鼠表现出较强的运动能力（P<0.01），
　　5.丁苯酞可以缓解帕金森病模型小鼠的多巴胺能神经元损伤：与模型组相比，治疗组小鼠黒质TH阳性细胞形态趋于正常，神经元凸起增多，细胞数量明显增加（P<0.01）。
　　6.丁苯酞可以缓解帕金森病模型小鼠脑内炎症反应：与模型组相比，治疗组小鼠黒质区IBA-1、IL-1β阳性细胞数量明显降低（P<0.01），
　　7.丁苯酞可以影响帕金森病模型小鼠MAPK通路的激活：与对照组相比，模型组小鼠黒质区P-JNK、P-P38的表达水平明显升高（P<0.01）；与模型组相比治疗组的P-JNK、P-P38的表达水平出现显著的下降（P<0.01）；而三组小鼠P-ERK的水平未见明显异常(P>0.01)。
　　8.丁苯酞可以改善帕金森病模型小鼠黒质区内质网应激：与对照组相比，模型组小鼠黒质区CHOP的表达水平明显升高(P<0.01），治疗组小鼠黑质区CHOP的表达水平未见明显差异（P<0.01）
　　结论：
　　1.单次给予腹腔注射LPS能够成功诱导慢性帕金森病小鼠模型，其发病机制可能与长期持续性的脑内炎症反应有关。
　　2.丁苯酞对LPS腹腔注射诱导帕金森病模型小鼠具有神经保护作用，该保护机制可能与缓解脑内慢性炎症反应、降低MAPK通路的激活及改善内质网应激有关。

目录

声明

前言

材料与方法

1.实验材料

2.实验方法

3.行为学监测

4.小鼠中脑黒质免疫组化染色

5.Western Blot

6.统计学分析

结果

1. 单次腹腔注射LPS对PD模型的诱导作用

2.丁苯酞对腹腔注射LPS诱导的PD模型小鼠的保护作用

讨论

1. 单次给予腹腔注射LPS能够成功诱导慢性帕金森病小鼠模型

2.丁苯酞对LPS腹腔注射诱导帕金森病小鼠具有神经保护作用

3.丁苯酞对LPS腹腔注射诱导帕金森病小鼠神经保护作用的可能机制

结论

参考文献

致谢

附录

附录B个人简历

附录C综述:丁苯酞神经保护作用的研究进展