miR-26a靶向EZH2抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性

摘要

目的 探讨miR-26a对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖能力的影响及其与EZH2的靶向关系. 方法 构建pcD-NATM6.2-pre-miR-26a、pmirGLO-EZH2野生型(pmirGLO-EZH2-WT)和突变型(pmirGLO-EZH2-MT)重组质粒,并采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-26a在ACC-M细胞中的转染效率,并与未处理组(control组)进行比较.同时采用MTT法分析miR-26a过表达对ACC-M细胞增殖活性的影响,并采用双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测miR-26a与EZH2的靶向关系. 结果 将测序结果采用NCBI BLAST进行序列比对,结果显示pre-miR-26a、EZH2-WT和EZH2-MT重组质粒均构建成功,无碱基缺失或突变.qRT-PCR显示转染pre-miR-26a的ACC-M细胞其miR-26a的表达显著高于未处理组(P＜0.001).MTT分析显示miR-26过表达可以明显抑制ACC-M细胞的增殖活性(P＜0.05).此外,双荧光素酶报告基因系统(P=0.001)、qRT-PCR和Western blot均证实miR-26a能够显著下调EZH2的mRNA(P=0.001)和蛋白的表达(P=0.006). 结论 miR-26a能够显著抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系.