miR-124抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞的增殖活性及其对EZH2的靶向调控

摘要

目的:探讨miR-124对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖活性的影响以及其与EZH2的靶向关系。方法:构建pre-miR-124、野生型EZH2(EZH2-WT)和突变型EZH2(EZH2-MT)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-124的转染效率,MTT法检测miR-124过表达对CAL27细胞增殖活性的影响;另外,利用双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot验证miR-124与EZH2的靶向关系。结果:采用NCBI BLAST软件比对载体测序,结果显示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-124、pmirGLO-EZH2-WT和pmirGLO-EZH2-MT表达载体构建成功,qRT-PCR显示转染pre-miR-124后CAL27细胞内miR-124的表达水平显著升高(P<0.001)。MTT分析结果显示miR-124过表达能够明显抑制CAL27细胞的增殖活性(P<0.05),双光素酶报告基因显示共转染pre-miR-124和EZH2-WT的CAL27细胞荧光活性显著下降(P<0.001),且qRT-PCR的结果也显示转染pre-miR-124的CAL27细胞内EZH2的表达水平明显低于对照组(P<0.001),Western blot显示miR-124的过表达能够显著抑制EZH2蛋白水平的表达。结论:miR-124的过表达能够显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞的增殖,并且与EZH2之间存在具有良好的靶向关系。