FOXO3a对子宫内膜癌细胞生物学行为的调控作用和机制

摘要

目的 探究FOXO3a对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期生物学行为的调控作用和分子机制。方法 选择2019年3月至2021年12月陕西省人民医院妇科收治的子宫内膜癌确诊患者45例,收集患者的子宫内膜癌组织及与病灶邻近(距离>3 cm)的正常子宫内膜组织,采用qRT-PCR检测FOXO3a基因的表达水平,采用免疫组织化学染色法和Western blot检测FOXO3a蛋白表达水平。正常培养人子宫内膜癌细胞系HEC-1B和人子宫内膜上皮细胞HEECs,采用qRT-PCR检测HEC-1B和HEECs细胞中FOXO3a的mRNA表达水平,采用Western blot检测FOXO3a蛋白表达水平。将HEC-1B细胞分为5组:对照组、si-NC组、si-FOXO3a组、pcDNA-NC组和pcDNA-FOXO3a组。采用Western blot检测Bim、FasL、TRAIL、p27、p21、c-myc、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平;采用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布。结果 与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中FOXO3a的mRNA和蛋白表达水平均较低(P<0.01)。与HEECs细胞比较,HEC-1B细胞中FOXO3a的mRNA和蛋白表达水平均较低(P<0.01)。与对照组和si-NC组比较,si-FOXO3a组HEC-1B细胞增殖水平和细胞克隆数均升高(P<0.05),细胞处于G1期和G2/M期的比例均降低(P<0.05),S期细胞数量升高(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05)。与对照组和pcDNA-NC组比较,pcDNA-FOXO3a组HEC-1B细胞增殖水平和细胞克隆数均降低(P<0.05),细胞处于G1期的比例升高(P<0.05),S期细胞数量降低(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。与对照组和si-NC组比较,si-FOXO3a组HEC-1B细胞中Bim、FasL、TRAIL、p27和p21蛋白相对表达量均降低(P<0.05),c-myc、p-PI3K和p-AKT蛋白相对表达量均升高(P<0.05)。与对照组和pcDNA-NC组比较,pcDNA-FOXO3a组Bim、FasL、TRAIL、p27和p21蛋白相对表达量均升高(P<0.05),c-myc、p-PI3K和p-AKT蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。结论 FOXO3a通过负向调控抑制PI3K/AKT信号通路的激活,进而阻滞细胞周期、促进细胞凋亡和抑制细胞增殖,在子宫内膜癌HEC-1B细胞中发挥抑癌作用。