lncRNA ADPGK-AS1对视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的抑制作用及其调控机制

摘要

目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lncRNA ADPGK-AS1)对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响及其调控机制。方法收集2017年2月至2018年11月在驻马店市中心医院和郑州大学第一附属医院接受RB手术治疗的RB患者39例39眼的术中瘤旁组织和瘤体组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测ADPGK-AS1和miR-623在标本组织中的相对表达量。体外培养人RB细胞Y-79,将培养细胞分为小干扰RNA正常对照组(siRNA-NC组)、siRNA-ADPGK-AS1组、微小RNA正常对照组(miR-NC组)、miR-623组、siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-NC组和siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-623组,采用MTT法检测各组细胞增生率;采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭数;采用双荧光素酶报告实验检测Y-79细胞中ADPGK-AS1和miR-623的靶向关系;采用Western blot法检测不同干预组细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达量。结果与瘤旁组织比较,RB组织中ADPGK-AS1相对表达量升高,miR-623相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(t=40.522、48.497,均P<0.01);与siRNA-NC组比较,siRNA-ADPGK-AS1组细胞中Ki-67蛋白相对表达量明显下降,Y-79细胞增生A值显著降低,差异均有统计学意义(t=26.833、18.522,均P<0.01);siRNA-ADPGK-AS1组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=22.123、26.183,均P<0.01);siRNA-ADPGK-AS1组迁移细胞数和侵袭细胞数均明显少于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=12.385、19.201,均P<0.01);双荧光素酶报告实验证实ADPGK-AS1可靶向结合miR-623;miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量明显低于miR-NC组,差异均有统计学意义(t=22.137、22.200、21.094,均P<0.01);与miR-NC组比较,miR-623组Y-79细胞增生A值显著降低且迁移细胞数和侵袭细胞数均明显减少,差异均有统计学意义(t=16.398、11.400、17.846,均P<0.01);siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显高于siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-NC组,差异均有统计学意义(t=20.795、17.493、23.479,均P<0.01);与siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-NC组比较,siRNA-ADPGK-AS1+anti-miR-623组增生A值明显升高且迁移细胞数及侵袭细胞数明显增多,差异均有统计学意义(t=15.600、14.495、17.855,均P<0.01)。结论敲低ADPGK-AS1基因可抑制RB细胞增生、迁移和侵袭,其作用机制与miR-623的表达上调有关。