巨噬细胞介导的炎性微环境对牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

摘要

目的研究巨噬细胞介导的炎性微环境对牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLCs）增殖和成骨分化的影响。方法通过1mg/mL脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活RAW264.7巨噬细胞得到含炎性因子的条件培养基模拟体内炎性微环境,原代分离培养PDLCs,分别在条件培养基（LPS-CM组）,普通培养基（Ctrl组）下培养PDLCs,MTT法检测PDLCs的增殖情况;加入成骨诱导剂共培养3d、7d,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）试剂盒检测ALP活性,Real-time PCR检测Runt相关基因2（runt-related transcription factor2,RUNX2）、骨钙素（osteocalcin,OCN）、I型胶原（collagen I,COL-I）m RNA的表达,Western Blot检测RUNX2、OCN、COL-I蛋白表达水平;成骨诱导14d茜素红染色观察钙化结节。分析比较2组PDLCs增殖和成骨分化的差异。结果 MTT法检测,LPS-CM组PDLCs的OD值低于Ctrl组（P〈0.05）;相同时间点LPS-CM组的RUNX2、OCN、COL-I基因的m RNA表达均低于Ctrl组（P〈0.05）,蛋白表达,除了OCN 3 d两组比较无统计学意义（t=2.75,P=0.056）外,其余显示相应的RUNX2、OCN、COL-I的蛋白表达量LPS-CM组低于Ctrl组（P〈0.05）;ALP活性检测,LPS-CM组ALP活性高于Ctrl组,分别是3d时1.58倍（t=5.91,P=0.030）;7d时为1.29倍（t=6.01,P=0.046）;14d钙化结节LPS-CM组少于Ctrl组,差异有统计学意义（t=8.63,P=0.048）。结论巨噬细胞介导的炎性微环境抑制PDLCs的增殖与成骨分化。