可诱导表达mIL-12单链融合蛋白的腺病毒载体的构建

摘要

目的:构建带mIL-12单链融合蛋白基因并可经RU486诱导表达的重组腺病毒载体,以期用于体内的基因治疗研究.方法:构建穿梭质粒pDC-RUmIL-12,使mIL-12单链融合蛋白基因和启动子在RU486诱导表达系统调控之下,酶切、测序鉴定正确后,将其与Admax腺病毒包装系统的辅助质粒共转染HEK293细胞后,构建出可调控的重组腺病毒载体,用mIL-12引物对病毒进行鉴定,氯化铯密度梯度离心纯化病毒,最终稀释法测定其滴度,并在结肠癌SW620细胞中Western Blot和ELISA法检测其基因调控效果.结果:经PCR鉴定证实可调控腺病毒载体Ad-RUmlL-12构建正确,病毒滴度达到4.62×1010pfu/mL.当给予诱导剂RU486后,腺病毒载体可以诱导表达mIL-12单链融合蛋白,表达量随着诱导剂浓度而增加,而没有RU486时,几乎没有mIL-12蛋白的表达,结论:成功构建了重组腺病毒 Ad-RUmIL-12,可以通过RU486诱导mIL-12单链融合蛋白的表达,为下一步体内基因治疗奠定了良好的基础.