牛病毒性腹泻病毒陕西株的分离与NS5b基因序列测定

摘要

[目的]分离并鉴定陕西省牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV).[方法]采集腹泻犊牛的肠系膜淋巴结,处理后接种于MDBK细胞,盲传,逐日观察是否有细胞病变产生.采用病毒蚀斑技术对病毒克隆纯化后,提取其RNA,进行RT-PCR鉴定.将扩增的NS<5b基因克隆人pMD18-T载体中,采用碱裂解法小量提取质粒,并对质粒进行EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切、Sal Ⅰ单酶切及PCR鉴定,对阳性克隆进行核苷酸序列测定及分析.采用病毒蚀斑试验测定分离毒株的半数组织培养感染量(TCID5b).[结果]盲传4代后细胞出现典型、规律的细胞病变.RT-PCR扩增出预期长度(360 bp)的基因片段,核苷酸序列分析结果表明,所扩增的基因为牛病毒性腹泻黏膜病病毒NS5b基因,其与BVDV VEDEVAC株NSsb基因核苷酸序列有99%同源性.BVDV陕西株的半数组织培养感染量(TCID50)为3.6.[结论]成功分离了牛病毒性腹泻病毒陕西株,为陕西省BVDV的防治提供了理论依据.