胰岛素对大鼠缺血后再灌注心肌细胞凋亡、Bad表达影响及机制研究

摘要

目的:观察胰岛素对大鼠缺血后再灌注心肌细胞凋亡及促凋亡蛋白Bad磷酸化表达的影响,以进一步探讨胰岛素在缺血再灌注损伤中的抗凋亡机制.方法:46只SD雄性大鼠随机分为四组:缺血再灌注对照组(I/R,n=12),实施30 min缺血/180 min再灌注;胰岛素组(INS,n=12),于再灌注期前5 min颈静脉内输注胰岛索(60 U/L,每小时4 ml/kg)至灌注期结束:胰岛素+LY294002组(INS+LY,n=12),再灌注前10 min静脉注射LY294002(0.3 mg/kg),5 min后再静脉输注胰岛索+LY294002(每小时30μg/kg);假手术组(SHAM,n=10):仅给予冠脉穿线,不实施结扎.实验结束后,用原位末端标记法(TUNEL)和DNA梯带法(DNA Ladder)标测细胞凋亡,用免疫组化和Western-blotting法检测磷酸化Bad(pBad)表达.结果:①与SHAM组相比.I/R组凋亡指数(AI)明显增加(JP<0.01),pBad表达降低(p<0.05);②与I/R组相比,INS组AI值明显减少(P<0.01),pBad表达升高(P<0.01);③与INS组相比,INS+LY组Al值明显增加(P<0.01),pBad表达降低(P<0.05).结论:①缺血再灌注可导致心肌组织pBad低表达:②胰岛素对大鼠在体缺血再灌注心肌有明显抗凋亡作用;③P13K/Akt/Bad途径可能为胰岛素抗缺血再灌注诱导心肌凋亡的重要信号转导机制,其机制可能与胰岛素通过P13K/Akt途径减少pBad表达有关.