miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

摘要

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响.方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性.利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证.利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化.使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响.结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关.靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3的3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因.Western blot结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平(P<0.001),转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平(P<0.01).Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力(P<0.001),转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力(P<0.05);与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱(P<0.001);与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱(P<0.05),共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异(P>0.05).结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点.