MLK4低表达调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡的机制研究

摘要

目的:观察MLK4低表达是否通过调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡.方法:利用qRT-PCR和Western blot方法检测MLK4在人正常近端肾小管上皮细胞HK-2和肾细胞癌细胞系786-0中的表达情况;脂质体Lipofectamine 3000转染MLK4 siRNA(si-MLK4)至786-0细胞系后用qRT-PCR和Western blot两种方法检测肾细胞癌细胞系中MLK4的沉默效率;CCK-8和Ki-67方法检测si-MLK4对786-0细胞系增殖的影响,Transwell方法检测si-MLK4对786-0细胞系迁移的影响,流式细胞术检测si-MLK4对786-0细胞系凋亡的影响,DCF-DA分析法检测si-MLK4对786-0细胞系ROS水平的影响,同时利用Western blot方法检测MAPKs信号通路的改变情况.结果:qRT-PCR和Western blot结果显示MLK4在人肾细胞癌细胞系786-0中表达量明显高于人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2;qRT-PCR和Western blot结果显示:相对于si-NC组,si-MLK4转染人肾细胞癌细胞系后MLK4在mRNA和蛋白水平表达量均降低;CCK-8和Ki-67结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0增殖,Tranwell结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0迁移,而流式细胞术结果显示si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0凋亡;DCF-DA分析结果发现si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0 ROS的产生,Western blot结果显示:p38、p-ERK1/2、p-JNK磷酸化水平明显增加,提示si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡.结论:si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡,提示MLK4可作为预防肾细胞癌发生发展的靶点,为治疗肾细胞癌提供了新的理论基础和思路.