小肠RNA对缺血再灌注条件下移植小型猪骨髓内皮祖细胞的体外干预效应观察

摘要

目的 观察小肠RNA对小型猪骨髓内皮祖细胞(EPCs)生长的影响及适宜浓度,以及小肠RNA对缺血再灌注条件下移植EPCs的干预效应.方法 通过Ficoll方法分离,差速贴壁纯化,诱导生成猪EPCs,分离提纯大鼠小肠RNA.设立不同浓度RNA组,观察其对EPCs生长增生等细胞功能的影响;依据适宜浓度,设立小肠RNA预处理组、缺血再灌注后加小肠RNA组、单纯小肠RNA孵育组、单纯缺血再灌注组和正常对照组,观察细胞生长曲线和LDH变化,还原酶法测量NO、NOS,观察EPCs的分泌功能.应用流式细胞仪观察EPCs凋亡情况,Western Blotting观察EPCs表面Flk-1的表达差异.结果 小肠RNA在20μg/ml左右浓度促EPCs增生作用最明显;小肠RNA预处理组EPCs的Flk-1水平上调,EPCs凋亡较少,LDH和iNOS生成明显低于单纯缺血再灌注组和缺血再灌注后添加小肠RNA组,但高于正常对照组和单纯小肠RNA处理组.结论 适宜浓度的小肠RNA可以促进EPCs的增生;小肠RNA预处理可以通过上调EPCs表面Flk-1水平,减少凋亡和分泌不利因子等机制增强EPCs抵抗缺血再灌注后移植的微环境改变的不利影响.