小型猪骨髓内皮祖细胞的体外培养及分化的比较

摘要

目的:比较两种方法进行小型猪骨髓内皮祖细胞(EPCs)体外培养及分化的差异,为EPCs移植应用于临床提供实验依据.方法:利用F icoll法分离猪骨髓单个核细胞,4 h初步差速贴壁筛选细胞后,设立24 h贴壁组和24 h未贴壁组,均用含血管内皮生长因子(VEGF)的专用培养基进行贴壁培养和诱导分化,动态观察不同时期的细胞生长情况并进行生物学鉴定,包括CD133,CD31,flk-1,Ⅷ因子的荧光标记激光共聚焦检测、电镜超微结构鉴定、D iI标记的乙酰化低密度脂蛋白(D iI-acLDL)摄取试验和内皮细胞分泌功能测定.结果:两种方法均获得一定数量的EPCs,24 h未贴壁组细胞形态相对单一;“迟发性增殖”的特点明显;荧光标记率较高;内皮细胞的生物学标志出现较早和明显;造血祖细胞标志消失较早,表达较弱;细胞吞噬能力弱;细胞分泌的NO和cNOS含量均较高.结论:小型猪骨髓EPCs可以采用F icoll密度梯度法结合差速贴壁筛选法进行分离和体外扩增;24 h未贴壁细胞经诱导后获得的EPCs纯度、成熟度、细胞功能和数量均优于24h贴壁组和48 h未贴壁组.