桑白皮多糖调控circDLGAP4/miR-320对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的作用

摘要

目的研究表明桑白皮多糖具有抗氧化作用,而其对心肌细胞氧化损伤的影响尚不清楚,文章旨在探讨桑白皮多糖对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及分子机制。方法H9C2细胞缺氧培养6 h后再复氧6 h,作为缺氧/复氧(H/R)组,不做任何处理的细胞作为正常对照组,用0.1、0.2、0.4μg/mL的桑白皮多糖预处理H9C2细胞,而后进行缺氧/复氧处理,作为H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组;将pcDNA、pcDNA-circDLGAP4转染至H9C2细胞后进行缺氧/复氧处理,记为H/R+pcDNA组、H/R+pcDNA-circDLGAP4组;将si-circDLGAP4转染至H9C2细胞后用0.4μg/mL桑白皮多糖处理,再进行缺氧/复氧处理,记为H/R+桑白皮多糖高剂量+si-circDLGAP4组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞术分别检测以上各组细胞活性和凋亡率;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测MDA含量、SOD活性和LDH活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞circDLGAP4和miR-320的表达水平。双荧光素酶报告实验检测circDLGAP4和miR-320的靶向关系。结果与正常对照组相比,H/R组H9C2细胞活性降低,凋亡率升高,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞活性升高,凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。与正常对照组H9C2细胞MDA[(18.35±1.11)nmL/mL]、LDH(26.81±1.11)U/L,SOD活性[(65.53±2.75)U/L]相比,H/R组H9C2细胞中MDA含量[(95.02±3.67)nmL/mL]及LDH活性[(133.97±5.30)U/L]升高,SOD活性[(11.92±0.63)U/L]降低(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞中MDA含量[(71.43±3.00)、(53.62±1.69)、(35.81±1.36)nmL/mL]及LDH活性[(106.43±4.00)、(84.50±2.68)、(58.51±1.94)U/L]降低,SOD活性[(24.60±1.14)、(42.37±2.26)、(58.27±2.61)U/L]升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。与正常对照组相比,H/R组H9C2细胞中circDLGAP4表达水平降低,miR-320表达水平升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞中circDLGAP4表达水平升高,miR-320表达水平降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。与pcDNA组相比,pcDNA-circDLGAP41、2、3组circDLGAP4表达水平升高。与H/R+pcDNA组相比,H/R+pcDNA-circDLGAP4组circDLGAP4表达水平升高,miR-320表达水平降低,MDA含量、LDH活性降低,SOD活性升高;H9C2细胞活性升高,H9C2细胞凋亡率及Bax表达水平降低,而Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。与H/R+桑白皮多糖高剂量组相比,H/R+桑白皮多糖高剂量+si-circDLGAP4组circDLGAP4表达水平降低,miR-320表达水平升高,H9C2细胞中MDA含量、LDH活性升高,SOD活性降低,H9C2细胞活性降低,H9C2细胞凋亡率及Bax表达水平升高,而Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。circDLGAP4和miR-320的互补序列。wt-circDLGAP4与miR-320共转染的细胞荧光素酶活性较与miR-NC共转染的降低(0.96±0.08 vs 0.35±0.03,P<0.05)。结论桑白皮多糖通过调控circDLGAP4/miR-320对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤起保护作用。