降血压肽前体的设计和克隆及其在大肠埃希菌中的表达

摘要

目的 降血压肽(antihypertensive peptide, AP)是一类能降低人体血压的小分子肽,是血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin convering enzyme inhibitor, ACEI),可通过抑制体内血管紧张素Ⅱ的生成达到降低血压的目的 .AP通常含有少数几个氨基酸残基,难以直接表达,因此文中设计含多种降压活性肽段的AP前体(antihypertensive peptide precursor, APP),构建原核表达载体,并在所构建的基因工程菌进行表达. 方法 筛选多种已报道的具有高体内降压活性的AP,经胃肠消化酶酶切位点串联成APP.基于大肠埃希菌偏爱密码子,人工合成相应的多肽基因(app),PCR扩增,克隆至表达载体pET-22b,转化E.coli BL21感受态细胞.重组质粒经双酶切和DNA测序鉴定,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(sopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达重组APP. 结果 APP基因正确克隆至表达载体pET-22b中.诱导表达产物经SDS-PAGE分析,显示在相对分子质量11000处出现条带,与预期的重组APP大小相符. 结论 人工设计的APP在大肠埃希菌中获得成功表达,为AP的工业化制备打下基础.