利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R在大肠埃希菌中的表达与优化

摘要

目的 建立利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R基因工程表达体系,为推进利拉鲁肽生物类似药的产业化开发奠定基础.方法 优化密码子并通过重叠PCR扩增获得GLP-1(7-37)K34R编码基因(glp1a),构建glp1a与GST、Ub、SUMO 3种标签蛋白在大肠埃希菌中融合表达,分别从诱导时机、诱导温度、诱导时间和IPTG浓度方面对三种标签蛋白的表达条件进行优化.通过镍柱亲和层析纯化,并由肠激酶切除标签,回收纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和HPLC分析检测.结果 3种标签中,Ub融合的GLP-1(7-37)K34R蛋白表达量最高,高达130 mg·L-1.将高表达的Ub-GLP-1(7-37)K34R蛋白经纯化酶切回收,获得的蛋白与标准蛋白比对分析显示所获得目的肽完全正确.结论 成功利用大肠埃希菌表达出GLP-1(7-37)K34R蛋白,确定蛋白表达的最优条件和最佳融合标签,建立蛋白纯化体系得到含量和纯度较高的目的蛋白.