抗菌肽模式肽PGYa的分子设计、克隆及在毕赤酵母中的分泌表达

摘要

在α-螺旋抗菌肽序列比较和两亲性分析的基础上,提取序列模板,计算机辅助(螺旋轮法)设计出新型抗菌肽模式肽PGYa(peptide以Gly开头,以Tyr-NH2结尾),然后选用毕赤酵母(Pichia pastoris)偏爱密码子,设计合成了PGYa基因(rPCR法).所合成的基因全长为94 bp,并在其N端引入Kex2裂解位点,以保证表达抗菌肽具有天然N端.基因克隆人pPICZα-A质粒,构建分泌型酵母表达载体pPICZα-A-PGYa.在AOX1(醇氧化酶)启动子调控下,PGYa蛋白获得分泌表达,其分子量约为2.8 kD.初步抑菌(Escherichia coli DH5α)活性显示,PGYa有较好的抗菌活性.