重构型人caspase-7基因对肿瘤细胞的促凋亡作用

摘要

目的观察重构型caspase-7的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用.方法用反转录PCR方法获取野生型人caspase-7基因,用重组PCR构建了两种重构型caspase-7基因,即大、小亚基序列次序颠倒的rev-ca2spase-7以及N-端带有绿脓杆菌外毒素转膜结构域部分肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)的基因.将两种重构型caspase-7基因克隆入表达载体pIRES2-EGFP, 脂质体法转染肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察、MTT检测等方法检测重组基因的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性.结果成功获得了caspase-7基因,构建了rev-caspase-7基因和rev-caspase-7与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)基因及其表达载体.将两种重构型caspase-7转染肿瘤细胞后,证实细胞发生凋亡.结论两种重构型caspase-7均可以有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡.