绿色荧光蛋白基因gfp与抑癌基因p53重组质粒在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达及诱导凋亡的研究

摘要

为了探讨绿色荧光蛋白基因gfp和p53基因重组质粒在人脑胶质瘤细胞中的表达情况(表达GFP)以及重组质粒如何诱导细胞的凋亡等,以进一步更好地利用GFP作为报道蛋白.本实验采用KpnⅠ、NotⅠ双酶切法获取约760bp的gfp基因片段,插入含野生型p53 cDNA的真核表达载体质粒pCEP4-P53的相应酶切位点,经转化感受态菌,筛选出重组质粒pCEP4-P<,53>-GFP;采用非脂质体转染试剂法将重组质粒染入人脑胶质瘤细胞株U251;通过普通光学显微镜观察、荧光显微镜观察、细胞DNA电泳及TUNEL染色检测U251细胞的凋亡情况.结果表明构建的重组质粒pCEP4-P<,53>-GFP既能表达GFP,即在荧光显微镜下发出绿色荧光,又能诱导细胞发生凋亡;本实验为GFP作为报道蛋白及其在生物医学中的进一步更为广泛的应用打下一定的实验基础.