前列腺特异性抗原启动子（PSAP）调控促凋亡基因Caspase-7载体的构建及其对前列腺癌细胞的特异性杀伤作用研究

摘要

该实验构建了前列腺特异性抗原启动子(PSAP)调控的促凋亡基因Caspase-7表达载体,并观察其对前列腺癌细胞的促凋亡作用.该实验首先提取基因组DNA,通过PCR法获得PSAP基因片段,利用基因重组方法以PSAP分别替换绿色荧光蛋白载体pIRES2-EGFP和克隆入效应型Caspase-7基因的绿色荧光蛋白载体Caspase-7pIRES2-EGFP中的pCMV启动子片段,分别获得了由PSAP调控的绿色荧光蛋白载体和带有效应型Caspase-7基因的绿色荧光蛋白载体PSAPpIRES2-EGFP质粒和PSAP-Caspase-7pIRES2-EGFP质粒.利用脂质体包裹将所构建载体分别转染至PC-3m(前列腺癌)、Hep2(喉癌)及MC3T3(正常成纤维)细胞中,通过荧光是显微镜观察转染细胞中绿色荧光蛋白表达及细胞形态变化,免疫组化检测细胞中效应型Caspase-7蛋白的表达状况,细胞计数及MTT法观察转染不同表达载体后各类细胞生长变化.以上实验结果证实前列腺特异性抗原启动子(PSAP)可在前列腺癌细胞中特异性调控其下游Caspase-7基因的表达,并发挥其促凋亡作用,从而特异性地诱导前列腺癌细胞发生凋亡,而对正常细胞及非前列腺起源细胞不产生影响.

目录

独创性声明

保护知识产权声明

英文缩写词表

文献回顾

一、进展期前列腺癌治疗基础研究现状

二、Caspases家族研究现状

三、Caspases-7对前列腺癌细胞作用的研究概况

结束语

前言

实验部分

第一部分实验中各类表达载体的构建与鉴定

实验材料

实验方法

实验结果

结果讨论

第二部分PSAP-Casp7-pIRES2-EGFP对前列腺癌细胞特异性杀伤作用研究

实验材料（同前）

实验方法

实验结果

结果讨论

讨论

小结

参考文献

致谢

附：硕士在读期间论文撰写及发表情况