HIV-1整合酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达和定位

摘要

目的构建重组基因表达载体pcDNA6／V5-HisA—IN并观察其在Hela细胞中的表达．对HIV-1整合酶表达以后在细胞里的定位情况进行研究．方法通过PCR扩增和定向克隆技术构建重组真核表达载体D。DNA6／V5-HisA—IN．以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞．细胞用4％的多聚甲醛固定以后，经过PI对细胞核染色，整合酶抗体跟整合酶反应以后，用FITC标记的二抗进行孵育，用共聚焦显微镜观测整合酶在细胞中的表达情况．结果经过定向克隆和测序鉴定证实，重组真核表达载体pcDNA6／V5-HisA—IN构建成功．免疫荧光实验显示，Lipofectamine2000介导质粒转染Hela表达成功，整合酶主要定位在细胞核．结论HIV-1整合酶真核表达载体构建成功，转染以后，整合酶表达并且主要定位在细胞核．