稳定高效表达p21WAF1/CIP1的HCT/8-WAF1细胞株的建立

摘要

目的:建立高效、稳定表达p21WAF1/CIP1大肠癌细胞株HCT/8-WAF1.方法:应用阳离子脂质体分别将带有目的基因WAF1的pcDNA3及空白pcDNA3质粒转染大肠癌细胞株HCT/8,经G418进行阳性筛选,将筛选的阳性细胞连续传代培养,应用免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1的表达.结果:经G418筛选后,空白对照细胞全部死亡,转染目的基因及空质粒组的细胞存活,可连续传代培养30代以上,并选择HCT/8作对照;免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1表达结果显示转染目的基因的HCT/8细胞p21WAF1/CIP1表达阳性细胞率(89.96%)显著高于转染空质粒组(8.02%)和空白对照组(3.39%)(F=16 608.99,P＜0.001);各代间差异无显著性(F=2.171,P＞0.05).结论:HCT/8-WAF1是一株高效、稳定表达p21WAF1/CIP1的大肠癌细胞株.