逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因的表达

摘要

目的:克隆、分析ICR小鼠MN/CA9基因序列,并检测MN/CA9基因在ICR小鼠各组织中的表达.方法:分别取ICR小鼠小肠、肝、肾、脾、胃、胸腺、心脏、卵巢、肺、胰腺、肌肉、皮肤、子宫和膀胱新鲜组织,采用胍尼啶异硫氢酸呱酚氯仿提取法(GIT)提取总RNA.合成cDNA的第1链和第2链,连接EcoRⅠ载体,EcoRⅠ末端磷酸化,XhoⅠ消化,将cDNA构建到ZAP express vector进行包装、种植培养,筛选、切取噬菌体,使用引物扩增后进行DNA序列分析.用逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因在上述组织中的表达.结果:使用人类MN/CA9基因片段做探针,用放射性同位素32P标记探针,筛选1.47×103大肠埃希菌落,杂交后发现一阳性cDNA信号,序列测定确定其含1 671 bp核苷酸序列(已在GenBank登录,登录号AB086322),这个序列与人类的MN/CA9(基因序列号Z54349)有69.1%的同源性.在引物P521-P1193区间,MN/CA9基因在小鼠小肠、子宫、肌肉、胰腺、心脏、肺、胸腺、脾、肾、卵巢、胃和膀胱组织表达均较强,在皮肤和肝脏不表达.结论:MN/CA9基因在ICR小鼠组织中的表达与人类基本相同,可以用ICR小鼠进行MN/CA9基因的研究.