复合聚合酶链反应检测绿脓杆菌、肺炎支原体及白色念珠菌的效果评价

摘要

目的:探讨复合聚合酶链反应(PCR)方法检测绿脓杆菌(PA)、白色念珠菌(CA)和肺炎支原体(MP)DNA的效果.方法:选择PA外膜蛋白基因(OprI)、MP 45 000蛋白基因、CA 5SrRNA区特异的非转录区设计合成3对引物,探索用复合PCR方法检测3种病原体的反应体系和反应条件;针对设计合成的每1对引物,对3种支原体、4种细菌及2种真菌的DNA进行PCR检测,观察引物的特异性;分别用PA、MP和CA标准菌株提取的DNA为模板,检测该反应对每一种病原体DNA的敏感性.结果:通过上述3对引物及一定的反应体系和反应条件所建立的复合PCR体系可以同时检测PA、CA及MP的DNA,分别出现275、684和144 bp的特异性扩增带,表明3对引物均具有较高的特异性,检测灵敏度PA可达1pg DNA,CA可达10pgDNA,MP可达100 fg DNA.结论:通过复合PCR方法可以同时检测出PA-DNA、CA-DNA和MP-DNA,具有快速、特异、敏感、简便及经济等优点.