重组人IL2-MUCl融合蛋白在大肠杆菌中的表达及鉴定

摘要

目的:构建表达人IL2-MUCI融合蛋白的工程菌,为制备新型MUCI疫苗提供实验依据.方法:通过PCR方法钓取人IL-2基因片段,将其克隆入pBS-SK-MUCI重组载体中,再将人IL2-M-UCI串联基因片段插入原核表达载体pGEX-4T-I.将重组的pGEX-IL2-MUCI转化大肠杆菌BL-21,通过IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白.结果:经酶切及基因测序证实获得的IL-2基因片段402 bp及IL2-MUCI基因片段852 bp基因序列正确;构建的pGEX-IL2-MUCI表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达GST-IL2-MUCI蛋白,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为64 000,与理论预期值相符.Western blotting分析表明该表达产物与抗人MUCI多克隆抗体及抗人IL-2单克隆抗体均具有特异性结合能力.结论:成功构建表达人IL2-MUCl融合蛋白的工程菌,为进一步研究以人MUCI为靶点的新型抗肿瘤疫苗奠定基础.