可溶性重组脂联素融合蛋白（GST-gAD）在大肠杆菌中的优化表达及其生物活性鉴定

摘要

目的：探讨可溶性重组脂联素球状结构域融合蛋白(GST-gAD)在大肠杆菌中的表达及其抑制人乳腺癌细胞MDA—MB-231增殖的生物学活性。 方法：①用CaCl2法制备感受态细菌JM109，质粒pGEX—KG—gAD转化大肠杆菌JM109，空载质粒pGEX—KG作为内对照同时转化JM109，筛选建株；②以正交设计软件正交设计助手Ⅱ选择L9(34)正交设计表在三个水平，四个因素(IPTG浓度，诱导时间，诱导温度，细菌密度OD600)下确定优化表达的最佳组合条件；③亲和层析法纯化GST—gAD；④用MTT法检测融合蛋白GST—gAD对人乳腺癌细胞MDA—MB-231增殖的影响。 结果：①重组质粒pGEX—KG—gAD成功转化大肠杆菌JM109；②对GSI-gAD诱导表达影响最大的因素为温度，最佳诱导表达组合条件为温度32℃，IPTG的浓度1.0 mmol/L，诱导前细菌的生长密度OD6001.0，诱导表达时间1.5h，此条件下其表达量占菌体总蛋白的6％左右；③获得纯化的分子量为42KD的GST—gAD；④GST—gAD浓度高于0.5μ mol/L时对人乳腺癌细胞MDA—MB-231的增殖具有明显的抑制作用 结论：①通过正交设计确定了可溶性GST—gAD融合蛋白在大肠杆菌中表达的优化条件；②GST-gAD融合蛋白在原核表达系统中可以有效表达，并且具有较好的生物学活性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照表

声明

第1章引言

第2章材料与方法

第三章结果

第4章讨论

第5章结论

参考文献

致谢

综述 脂联素与恶性肿瘤的研究进展

攻读学位期间的研究成果