甲基汞对雄性小鼠生殖细胞的毒性作用

摘要

目的:研究甲基汞(MeHg)对雄性小鼠生殖细胞氧化损伤、细胞周期、细胞凋亡及其凋亡相关蛋白表达的影响.方法:应用MTT法检测MeHg对雄性小鼠生殖细胞的毒性;采用TBA比色法、OPA荧光法和KI比色法分别检测睾丸生殖细胞中脂质过氧化产物MDA、H2O2的含量和GSH-Px酶活性;采用AO/EB染色法和流式细胞术2种方法检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测MeHg对细胞周期的影响;应用免疫组织化学方法检测与线粒体途径细胞凋亡相关Caspase-9和CytC蛋白表达.结果:体外给予0.1、1.0、10.0和100.0μmol·L-1的MeHg,随着甲基汞染毒剂量的增加,细胞存活率逐渐降低,作用2、4、8、24和48 h时,1.0、10.0和100.0 Fmol·L-1各剂量组与对照组比较差异有显著性(P<0.05).体内给予1/100、1/50和1/10 LD50的MeHg,随着甲基汞染毒剂量的增加,睾丸组织中MDA和H2O2含量有所增加,各剂量染毒组MDA含量与对照组比较差异具有显著性(P<0.05).H2O2含量随着甲基汞染毒剂量的增加,1/50 LD50、1/10 LD50组与对照组比较差异有显著性(P<0.01).GSH-Px酶活性随着甲基汞染毒剂量的增加有所降低,各剂量染毒组与对照组比较差异均具有显著性(P<0.05).随着染毒剂量的增大,凋亡率先增加,1/50 LD50达到最大,1/10LD50组逐渐降低,1/10 LD50组与对照组比较差异具有显著性(P<0.05).采用流式细胞术检测,G2/M期细胞百分数增加,1/50 LD50染毒组时与对照组比较差异具有显著性(P<0.05).Caspase-9与CytC阳性表达为棕黄色染色.分析结果表明,MeHg各剂量染毒组CytC表达先增加,随着染毒剂量的增加而逐渐降低,CytC表达各剂量染毒组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01),Caspase-9的表达在1/50 LD50组达到最高,1/50和1/10 LD50组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01).结论:甲基汞可以引起生殖细胞氧化损伤,影响细胞周期进程,使细胞有丝分裂延迟,并可能诱导细胞凋亡和凋亡相关蛋白的改变,对雄性生殖细胞具有细胞毒性作用.