靶向CTGF锤头核酶对人肝星状细胞Ⅰ型胶原及细胞周期的影响

摘要

目的:探讨靶向人结缔组织生长因子(CTGF)锤头核酶对人肝星状细胞系(LX-2)细胞Ⅰ型胶原转录和分泌及细胞增殖的抑制作用,为肝纤维化基因治疗提供实验依据.方法:构建含有CTGF锤头核酶及其5'和3'端分别连接一自剪酶cDNA序列的重组质粒pTriCTGF-Rz.实验分5组:未转染组、空质粒pTriEx2转染组、空质粒转染加TGF-1组、pTriCTGF-Rz转染组和pTriCTGF-Rz转染加TGF-1组.半定量RT-PCR检测CTGF mRNA和Ⅰ型胶原mRNA水平,ELISA检测LX-2细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,流式细胞仪检测LX-2细胞周期.结果:与pTriEx2转染组比较,pTriCTGF-Rz组LX-2细胞CTGF mRNA水平和TGF-1诱导CTGFmRNA的水平降低(P＜0.05),pTriCTGF-Rz组LX-2细胞Ⅰ型胶原mRNA转录和蛋白分泌减少,TGF-1诱导Ⅰ型胶原的转录水平降低(P＜0.05).与空质粒pTriEx2转染组比较,pTriCTGF-Rz转染组LX-2细胞G0-G1期细胞数增多(P＜0.05),S期细胞减少(P＜0.01).结论:靶向CTGF的锤头核酶具有抑制人肝星状细胞介导肝纤维化的作用,可能成为肝纤维化基因治疗的新途径.