小鼠成纤维细胞饲养层的制备及C57BL/6小鼠胚胎干细胞系的建立

摘要

目的:制备小鼠成纤维细胞饲养层并建立C57BL/6小鼠胚胎干细胞(ESC)系,为进一步建立人ESC系提供依据.方法:取妊娠12.5～14.5 d的胎鼠,组织消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)；收集C57BL/6小鼠3.5d的囊胚培养于小鼠制作的饲养层上；分离内细胞团(ICM),扩增传代40代以上.观察ESC集落的生长情况.采用碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫组织化学早期胚胎特异性表面抗原(SSEA-1)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)染色和体内分化实验对ESC集落进行鉴定.结果:分离培养后得到的ESC可稳定传代至40代以上,且均呈集落样生长.经AKP、SSEA-1和OCT-4染色后ESC均呈红褐色阳性表达,接种于裸鼠均可形成畸胎瘤；HE染色,有3个胚层组织成分.结论:成功建立了C57BL/6小鼠ESC系.