TRAIL和endostatin双基因-放射治疗对人血管内皮细胞增殖、周期和凋亡的影响

摘要

目的:观察重组质粒pshuttle-Egrl-shTRAIL-shES携带的双基因TRAIL和endostatin联合X射线照射后,对血管内皮细胞ECV304增殖、周期和凋亡的影响.方法:实验分为对照组、空载体pshuttle转染组、TRAIL单基因重组质粒pshuttle-Egrl-shTRAIL转染组、endostatin单基因重组质粒pshuttle-Egrl-shES转染组和TRAIL、endostatin双基因重组质粒pshuttle-Egrl-shTRAIL-shES转染组.细胞转染采用脂质体介导的方法进行,对照组不转染.细胞转染后给予X射线照射(照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy),采用ELISA法检测转染细胞中TRAIL和endostatin蛋白的表达,并分别采用MTT及PI单染或/和Annexin V双染流式细胞术(FCM)检测TRAIL、endostatin单/双基因治疗联合放射治疗对ECV304细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.结果:2.0 Gy X射线照射后与0 h比较,各时间点转染pshuttle-Egrl-shTRAIL-shES的ECV304细胞上清中TRAIL和endostatin蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),分别于12和24h达峰值；不同剂量X射线照射可诱导TRAIL和endostatin蛋白表达,且蛋白表达水平随照射剂量的增加而明显升高(P＜0.05或P＜0.01).MTT结果显示,X射线照射后,pshuttle-Egrl-shTRAIL、pshuttle-Egrl-shES和pshuttle-Egrl-shTRAIL-shES组ECV304细胞A490值均明显低于对照组和pshuttle组,并显示一定的时间-效应和剂量-效应关系,并伴有细胞凋亡率明显增加、G2+M期细胞百分数明显上升和G0/G1期细胞百分数明显下降.上述细胞效应,尤以pshuttle-Egrl-shTRAIL-shES组变化最为明显,与pshuttle-Egrl-shTRAIL和pshuttle-Egrl-shES组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:TRAIL和endostatin双基因联合放射治疗可抑制ECV304细胞生长,影响细胞周期进程,促进细胞凋亡,且其治疗效果优于单纯放射治疗或TRAIL/endostatin单基因-放射治疗.