缺氧微环境下3-甲基腺嘌呤对视网膜神经节细胞凋亡的影响

摘要

目的:观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响,阐明缺氧微环境下3-MA对RGCs的保护作用.方法:取对数生长期RGCs,分为对照组(PBS)、3-MA组(6 mmol·L-13-MA)、CoCl2组(300 μmol·L-1 CoCl2)、3-MA联合CoCl2组(6 mmol·L-13-MA+ 300 μmol·L-1 CoCl2).MTT法检测CoCl2最适浓度和各组RGCs增殖抑制率;啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞形态;单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色法检测RGCs的自噬空泡;Western blotting法检测各组RGCs中凋亡蛋白P53、Bax、caspase-9、caspase-3、iASPP和自噬蛋白LC3表达水平.结果:CoCl2的30％抑制浓度(IC30)为300 μmol·L1.3-MA联合CoCl2组的细胞增殖抑制率低于CoCl2组(P＜0.05).荧光显微镜下观察,各组细胞出现数量不等的凋亡小体和自噬泡.Western blotting法检测,与对照组比较,其他3组RGCs中P53、Bax、caspase-9和caspase-3和LC3表达水平均增高(P＜0.05),iASPP表达水平降低(P＜0.05); 3-MA联合CoCl2组的RGCs中P53、Bax、caspase-9和caspase-3和LC3表达水平低于CoCl2组(P＜0.05),iASPP表达水平高于CoCl2组(P＜0.05); 3-MA联合CoCl2组RGCs中P53、Bax、caspase-9和caspase-3和LC3表达水平高于3-MA组(P＜0.05),iASPP表达水平低于3-MA组(P＜0.05).结论:缺氧微环境下,自噬抑制剂3-MA对CoCl2诱导的RGCs凋亡具有保护作用.