3-甲基腺嘌呤

摘要： 背景:作者团队前期证实糖尿病促进牙周炎的发生发展,而牙周炎是否促进糖尿病发展?目的:探索牙周炎促进糖尿病发展的分子机制.方法:体外培养小鼠胰岛素瘤βtc6细胞,分为对照组、葡萄糖组、脂多糖组、葡萄糖+脂多糖组,采用不同浓度葡萄糖(0,25,50,100 mmol/L)和脂多糖(0,10,20,40 mg/L)单独或联合刺激βtc6细胞12 h,检查每组胰岛素分泌量.另外分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(5μmol/L)和自噬激活剂雷帕霉素(10 mmol/L)对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phoshatidylinositol-3-kinase/rotein kinase B/the mammalian target of rapamycin,PI3K/AKT/mTOR)信号通路进行干预,分为雷帕霉素+脂多糖组、雷帕霉素+葡萄糖组、雷帕霉素+葡萄糖+脂多糖组及3-甲基腺嘌呤+脂多糖组、3-甲基腺嘌呤+葡萄糖组、3-甲基腺嘌呤+葡萄糖+脂多糖组.CCK-8法检测各组βtc6细胞增殖情况,活性氧荧光探针检测各组βtc6细胞中活性氧聚集量,透射电镜观察各组βtc6细胞中自噬小体生成量,Western Blot法检测自噬蛋白及相关通路蛋白表达.结果 与结论:①葡萄糖浓度超过50 mmol/L时,胰岛素分泌量不受葡萄糖调节(P>0.05);脂多糖质量浓度大于20 mg/L时,胰岛素分泌量受到抑制(P<0.05);②加入3-甲基腺嘌呤后,3-甲基腺嘌呤+葡萄糖组、3-甲基腺嘌呤+脂多糖组、3-甲基腺嘌呤+脂多糖+葡萄糖组中Becline1、p-PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达较对照组显著降低(P<0.05);p62蛋白表达则呈相反趋势(P<0.05);③加入雷帕霉素后,Becline1、p-PI3K、p-mTOR/mTOR表达较对照组显著增加(P<0.05);④提示脂多糖能诱导胰岛β细胞过度自噬下调胰岛素分泌,该机制可能与沉默PI3K/AKT/mTOR信号通路有关.

摘要： 目的探究补肾活血方对血管性痴呆(Vascular Dementia,VD)大鼠模型自噬的影响。方法52周龄SD雄性大鼠50只,随机分为假手术组(Sham组)、模型组(VD组)、模型+补肾活血方组(BSHX组)、模型+雷帕霉素组(Rap组)和模型+3-甲基腺嘌呤组(3-MA组),每组10只大鼠。除Sham组外其余各组采用两血管阻断法(2-VO)建立VD模型。BSHX组中药灌胃治疗28天;自噬干预组于造模前30 min侧脑室给药。运用Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆能力;通过尼氏染色和透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)观察大鼠海马区病理形态及自噬变化;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测大鼠海马Beclin-1、P62以及微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白及mRNA表达情况。结果与VD组比较,BSHX组大鼠学习记忆能力显著提升(P<0.05),镜下观察BSHX组和3-MA组的细胞形态及数量均有改善,自噬小体鲜见,Beclin-1以及LC3蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05),P62蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05)结论补肾活血方可以降低VD大鼠海马区Beclin-1和LC3蛋白及mRNA的表达,提高P62的表达,通过抑制自噬的发生,减轻对神经细胞的损伤,改善学习记忆能力。

摘要： 目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬的调节以及相关细胞因子表达的影响。方法取人RPE细胞(ARPE-19细胞系)进行培养。将细胞分为4组。对照组:仅使用正常DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞;A2E组:将ARPE-19细胞置于含20μmol·L^(-1) A2E的DMEM-F12完全培养基中孵育12 h;3-MA组:使用含10 mmol·L^(-1)3-MA(美国Sigma-Aldrich公司)的DMEM-F12完全培养基预处理细胞1 h后,再用正常DMEM-F12完全培养基孵育细胞12 h;3-MA联合A2E组:先使用10 mmol·L^(-1)3-MA预处理细胞1 h,再将细胞放入含20μmol·L^(-1) A2E的DMEM-F12完全培养基孵育12 h。使用CCK|8法检测各组ARPE-19细胞增殖情况,透射电镜观察各组ARPE-19细胞超微结构,Western blot法检测各组ARPE-19细胞Beclin-1和P62自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色法检测各组ARPE-19细胞自噬标志物LC3蛋白的表达,使用Procarta细胞因子分析试剂盒检测各组细胞培养上清液10种细胞因子表达情况,10种细胞因子包括:细胞间黏附分子、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL^(-1)0、血管生成素2、血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子和VEGFA。结果与A2E组相比,3-MA联合A2E组细胞生存率下降了27.16%(P<0.01)。与A2E组相比,3-MA联合A2E组细胞培养上清液10种细胞因子含量均明显升高(均为P<0.01)。与对照组相比,3-MA组ARPE-19细胞超微结构无明显变化,而A2E组ARPE-19细胞胞浆内出现大量自噬泡;3-MA联合A2E组ARPE-19细胞自噬泡数量较A2E组明显减少。3-MA联合A2E组ARPE-19细胞胞浆内可见荧光斑点亮度较A2E组减弱,绿色荧光斑点数量也明显减少。与对照组相比,A2E组ARPE-19细胞Beclin-l蛋白相对表达量显著升高(P<0.001),P62蛋白的相对表达量显著降低(P<0.001)。与A2E组相比,3-MA联合A2E组ARPE-19细胞中Beclin-l蛋白相对表达量显著降低(P<0.01,),而P62蛋白相对表达量显著升高(P<0.001)。结论3-MA联合A2E作用下,ARPE-19细胞中炎症因子和血管生长因子的表达显著升高,自噬溶酶体数量及自噬蛋白的表达降低,自噬在年龄相关性黄斑变性的发生和发展中具有重要的调节作用。

摘要： 目的分析抵抗素(Resistin)对雨蛙素(caerulein,CN)诱导的小鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型的影响,并探讨其恶化机制。方法将BALB/C小鼠随机分为5组:对照组、CN组、Resistin+CN组、sh-Resistin+CN组和Resistin+CN+3-MA组,每组10只。对Resistin+CN组、sh-Resistin+CN组和Resistin+CN+3-MA组小鼠施用携带Resistin、sh-Resistin的AVV病毒载体;除对照组外,其他4组通过以1 h间隔腹膜内注射10次CN(100μg·kg^(-1))诱导CN胰腺炎模型;Resistin+CN+3-MA组在最后1次CN注射后2 h通过腹膜内注射3-MA(20 mg·kg^(-1))。采用干化学法测量血清淀粉酶、酶比色法检测脂肪酶活性。胰腺切片苏木精和伊红(HE)染色后进行胰腺组织病理学评分,采用TUNEL法测定胰腺组织细胞凋亡、透射电子显微镜观察胰腺自噬、Western Blot检测胰腺组织中Resistin表达。结果与CN组相比,Resistin+CN组的血清淀粉酶、脂肪酶活性,胰腺组织病理学评分和TUNEL阳性细胞百分比显著增加(P<0.05);sh-Resistin+CN组小鼠的血清淀粉酶、脂肪酶活性,胰腺组织病理学评分和TUNEL阳性细胞百分比显著降低(P<0.05)。与CN组相比,Resistin+CN组中每个细胞质区域的自噬泡百分比显著增加,sh-Resistin+CN组的自噬泡百分比显著降低。Resistin+CN组胰腺组织中P62、LC3Ⅱ水平较CN组显著增加,而sh-Resistin+CN组胰腺组织中P62、LC3Ⅱ水平较CN组显著降低。与Resistin+CN组相比,Resistin+CN+3-MA组的胰腺组织学评分以及胰腺组织中P62、LC3Ⅱ水平和自噬泡百分比均显著降低(P<0.05)。结论Resistin通过诱导自噬受损在SAP发展中发挥重要作用。

摘要： 目的探究自噬调控在大鼠缺血性脑卒中亚急性期神经修复中的机制。方法选取8周龄250~280 g的SPF级雄性SD大鼠96只,根据随机数字表法将其分为假手术组、模型组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤组,每组24只。模型组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤组均建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞再灌注模型,以Zea-longa评分1~3分为造模成功;假手术组除不插入线栓外,其余各步骤均相同。雷帕霉素组给予雷帕霉素(8 ng溶解于5μl 0.1%DMAO中),3-甲基腺嘌呤组给予3-甲基腺嘌呤(100μg溶解于5μl 0.1%DMAO中),假手术组、模型组给予5μl 0.1%DMAO溶液,均经侧脑室泵入。四组注射后留针5 min,1次/d,连续7 d。实验结束后,采用改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)、TTC染色、荧光染色、Western blot、免疫荧光检测探究缺血性脑卒中亚急性期大鼠神经功能及脑缺血半影区自噬相关指标的变化。结果模型组mNSS、脑梗死体积占比、微管相关蛋白轻链3(LC3)阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平均高于假手术组,神经元核心抗原(NeuN)阳性细胞占比低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。雷帕霉素组mNSS、脑梗死体积占比低于模型组,LC3阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平、NeuN阳性细胞占比均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3-甲基腺嘌呤组mNSS、脑梗死体积占比高于模型组,LC3阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平、NeuN阳性细胞占比均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠缺血性脑卒中亚急性期自噬激活具有神经保护作用,自噬抑制反而使神经功能损伤增加,适度自噬可能是缺血性脑卒中研究的关键。

摘要： 目的:探讨3-甲基腺嘌呤(3-MA)腹腔注射干预大鼠胃窦组织自噬的最佳药物剂量及用药时间.方法:将21只健康雄性SD大鼠随机分为七组:A组3-MA 10 mg/kg组、B组3-MA 15 mg/kg组、C组3-MA 30 mg/kg组,D组PBS组,E组空白对照组,F组3-MA 30 mg/kg 3 d组、G组3-MA 30 mg/kg 1 d组,每组3只.3-MA分别按照大鼠体重以剂量10、15、30 mg/kg进行腹腔注射,D组大鼠给予等量PBS溶液腹腔注射,空白对照组不予处理,A、B、C、D、E组干预15 d,F组干预3 d,G组干预1 d.干预结束后取胃窦组织,用Western blot法检测其LC3、P62的表达.结果:LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值大小排序为:D、E组>A组>B组>C组(均PC组>F组(均PB组>A组>D、E组(均PG组>F组(均P0.05).结论:3-MA腹腔注射可以抑制胃窦组织自噬,其中30 mg/kg为3-MA腹腔注射抑制大鼠胃窦组织自噬的最佳药物剂量,腹腔注射干预15 d自噬抑制效果最明显.

摘要： 目的 探讨成骨细胞自噬在铁环境变化情况下致骨代谢异常的作用.方法 实验分为对照组、枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)组、枸橼酸铁铵+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组、去铁胺(deferoxamine,DFO)+FAC+3-MA组、DFO+FAC组.用Western blot法检测成骨细胞自噬(LC3、P62、Beclin1)和成骨(collagen typeⅠ,COLⅠ)和骨钙素(bone gla-protein,BGP)标志蛋白的表达;共聚焦显微镜观察成骨细胞COLⅠ、BGP的荧光蛋白;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡;Von kossa染色法行钙结节染色;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性.结果 与对照组比较,FAC组LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达增加、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大,可溶性P62、COLⅠ、BGP蛋白表达减少,细胞凋亡增加,细胞矿化能力(0.68±1.63)及碱性磷酸酶活性(0.68±1.84)下降(P0.05).加入3-MA抑制剂后,与对照组、FAC组比较,LC3Ⅱ、可溶性P62、Beclin1蛋白表达减少、LC3Ⅱ/Ⅰ比值减小,COLⅠ、BGP蛋白表达进一步减少,细胞矿化能力(0.44±1.63)及碱性磷酸酶活性(0.53±0.97)下降,细胞凋亡、不可溶性P62蛋白表达增加(P0.05).与对照组比较,DFO+FAC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值变小,LC3Ⅱ、Beclin1、可溶性P62、COLⅠ、BGP蛋白表达减少,细胞凋亡增加,细胞矿化能力(0.86±0.39)及碱性磷酸酶活性(0.76±0.52)下降(P0.05).与FAC组比较,DFO+FAC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值变小,LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达减少(P0.05).结论 成骨细胞自噬在骨代谢过程中起着重要作用,过度激活或抑制自噬均会对细胞产生损害,适宜的自噬水平对成骨细胞的功能活性有促进作用.降铁后能降低高铁引起的过度自噬,促进成骨细胞的成骨功能.

摘要： 目的:研究人视网膜色素上皮(RPE)细胞光损伤中自噬与凋亡之间的关系,并探讨自噬抑制剂3甲基腺嘌呤(3MA)对光诱导下RPE细胞自噬和凋亡的影响.方法:实验研究.将体外培养的人RPE细胞(ARPE-19)随机分为12 h对照组、12 h模型组、12 h 3MA组以及24 h对照组、24 h模型组、24 h 3MA组.对照组采用锡纸包裹避光培养;模型组接受光照刺激;3MA组中加入3 mmol/ml 3MA后接受光照刺激,以自制三基色LED(发光二极管)冷光灯作为光源,在(16500±500) 1x光照强度下照射细胞12 h和24 h.透射电子显微镜观察每组细胞超微结构,流式细胞仪测定细胞存活率,激光共聚焦结合倒置荧光显微镜定性、定量分析自噬-溶酶体形态及荧光强度,Western blot法检测Beclin 1、LC3和P62自噬相关蛋白表达量.数据采用单因素方差分析.结果:在光照12h后,ARPE-19细胞自噬水平可以抵抗光损伤,降低细胞凋亡率(F=931.53,P＜0.001);光照24 h后细胞自噬水平超过其正常调节范围,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(F=1156.67,P＜0.001);使用3MA可抑制光诱导的ARPE-19细胞过度自噬,降低细胞凋亡率(F =2.856,P=0.027),进而保护细胞以应对光损伤.结论:ARPE-19自噬水平随光照时间而变化;随着光照时间延长,细胞凋亡率升高.抑制细胞的过度自噬可以保护ARPE-19细胞应对光损伤.

摘要： 目的 观察青光安颗粒剂含药血清对视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cells-5,RGC-5)损伤模型中线粒体自噬和相关蛋白的影响.方法 将14只大鼠随机分为空白对照组(3只)和青光安组(11只).青光安组灌胃青光安颗粒剂,空白对照组灌胃同等剂量的生理盐水,1次/d,灌胃7 d,第7天灌胃后提取含药血清和空白血清.培养RGC-5细胞,用谷氨酸毒性模拟青光眼所造成的神经细胞损伤,CCK8法筛选合适的含药血清和谷氨酸浓度.细胞分组为正常细胞组、空白血清组(谷氨酸+空白血清)、含药血清组(谷氨酸+含药血清)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+空白血清组(谷氨酸+3-MA+空白血清)、3-MA+含药血清组(谷氨酸+3-MA+含药血清组).细胞培养24 h后,荧光共定位检测线粒体自噬发生情况;Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)中LC3-Ⅱ/LC3-I、溶酶体相关膜蛋白1(lysosome associated membrane pro-tein1,LAMP1)蛋白的表达.结果 通过CCK8结果筛选,确定谷氨酸最佳的作用浓度为20 mmol/L,空白血清和含药血清的作用浓度均为20％.与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组的溶酶体含量显著降低(P<0.05).与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与3-MA+空白血清组相比,3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平水平显著降低(P<0.05).结论 青光安颗粒剂含药血清对青光眼损伤的保护作用可能通过抑制细胞的线粒体自噬,调控LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白的表达,从而起到对RGCs的保护作用.

摘要： 目的：观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine 3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞((endothelial progenitor cells，EPCs))增殖、凋亡及细胞周期的影响。rn 方法：密度梯度离心法获得Wister大鼠的骨髓EPCs，内皮祖细胞培养基(EGM．2MV)体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。实验分为5组：对照组及不同浓度(1．25mmol／1、2．5mmol／1、5mmol、10mmol／1)3-甲基腺嘌呤组。各组皆于24h后收集标本，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。采用SPSS13.0软件进行分析，均数以(±s)表示，采用单因素方差分析比较各组均数，(P0．05)无统计学意义。rn 结果：1．5mmol／l组促进内皮祖细胞增殖，与对照组相比较有统计学意义(P0．05)。3．5mmol／1)及10mmol／1组影响细胞周期的分布，10mmol／1组3-MA对细胞发生S期阻滞，G2／M细胞减少，与对照组比较(P<0．05)，5mmool组3-MAGO／G1期细胞减少、S和G2／M期增加，与对照组比较(P<0．05)。其余两组对细胞周期无明显影响。rn 结论：1．25mmol／1、2．5mmol/1组对EPCs的增殖及凋亡无明显影响，5mmol／1组对EPCs有增殖促进作用且对EPCs凋亡无明显影响，10mmol／1组抑制EPCs增殖并促进EPCs凋亡，细胞周期的重新分布可能是影响EPCs增殖的机制之一。

摘要： 目的：观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine 3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞((endothelial progenitor cells，EPCs))增殖、凋亡及细胞周期的影响。rn 方法：密度梯度离心法获得Wister大鼠的骨髓EPCs，内皮祖细胞培养基(EGM．2MV)体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。实验分为5组：对照组及不同浓度(1．25mmol／1、2．5mmol／1、5mmol、10mmol／1)3-甲基腺嘌呤组。各组皆于24h后收集标本，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。采用SPSS13.0软件进行分析，均数以(±s)表示，采用单因素方差分析比较各组均数，(P0．05)无统计学意义。rn 结果：1．5mmol／l组促进内皮祖细胞增殖，与对照组相比较有统计学意义(P0．05)。3．5mmol／1)及10mmol／1组影响细胞周期的分布，10mmol／1组3-MA对细胞发生S期阻滞，G2／M细胞减少，与对照组比较(P<0．05)，5mmool组3-MAGO／G1期细胞减少、S和G2／M期增加，与对照组比较(P<0．05)。其余两组对细胞周期无明显影响。rn 结论：1．25mmol／1、2．5mmol/1组对EPCs的增殖及凋亡无明显影响，5mmol／1组对EPCs有增殖促进作用且对EPCs凋亡无明显影响，10mmol／1组抑制EPCs增殖并促进EPCs凋亡，细胞周期的重新分布可能是影响EPCs增殖的机制之一。

摘要： 目的：观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine 3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞((endothelial progenitor cells，EPCs))增殖、凋亡及细胞周期的影响。rn 方法：密度梯度离心法获得Wister大鼠的骨髓EPCs，内皮祖细胞培养基(EGM．2MV)体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。实验分为5组：对照组及不同浓度(1．25mmol／1、2．5mmol／1、5mmol、10mmol／1)3-甲基腺嘌呤组。各组皆于24h后收集标本，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。采用SPSS13.0软件进行分析，均数以(±s)表示，采用单因素方差分析比较各组均数，(P0．05)无统计学意义。rn 结果：1．5mmol／l组促进内皮祖细胞增殖，与对照组相比较有统计学意义(P0．05)。3．5mmol／1)及10mmol／1组影响细胞周期的分布，10mmol／1组3-MA对细胞发生S期阻滞，G2／M细胞减少，与对照组比较(P<0．05)，5mmool组3-MAGO／G1期细胞减少、S和G2／M期增加，与对照组比较(P<0．05)。其余两组对细胞周期无明显影响。rn 结论：1．25mmol／1、2．5mmol/1组对EPCs的增殖及凋亡无明显影响，5mmol／1组对EPCs有增殖促进作用且对EPCs凋亡无明显影响，10mmol／1组抑制EPCs增殖并促进EPCs凋亡，细胞周期的重新分布可能是影响EPCs增殖的机制之一。

摘要： 目的：观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine 3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞((endothelial progenitor cells，EPCs))增殖、凋亡及细胞周期的影响。rn 方法：密度梯度离心法获得Wister大鼠的骨髓EPCs，内皮祖细胞培养基(EGM．2MV)体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。实验分为5组：对照组及不同浓度(1．25mmol／1、2．5mmol／1、5mmol、10mmol／1)3-甲基腺嘌呤组。各组皆于24h后收集标本，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。采用SPSS13.0软件进行分析，均数以(±s)表示，采用单因素方差分析比较各组均数，(P0．05)无统计学意义。rn 结果：1．5mmol／l组促进内皮祖细胞增殖，与对照组相比较有统计学意义(P0．05)。3．5mmol／1)及10mmol／1组影响细胞周期的分布，10mmol／1组3-MA对细胞发生S期阻滞，G2／M细胞减少，与对照组比较(P<0．05)，5mmool组3-MAGO／G1期细胞减少、S和G2／M期增加，与对照组比较(P<0．05)。其余两组对细胞周期无明显影响。rn 结论：1．25mmol／1、2．5mmol/1组对EPCs的增殖及凋亡无明显影响，5mmol／1组对EPCs有增殖促进作用且对EPCs凋亡无明显影响，10mmol／1组抑制EPCs增殖并促进EPCs凋亡，细胞周期的重新分布可能是影响EPCs增殖的机制之一。

摘要： 目的：观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine 3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞((endothelial progenitor cells，EPCs))增殖、凋亡及细胞周期的影响。rn 方法：密度梯度离心法获得Wister大鼠的骨髓EPCs，内皮祖细胞培养基(EGM．2MV)体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。实验分为5组：对照组及不同浓度(1．25mmol／1、2．5mmol／1、5mmol、10mmol／1)3-甲基腺嘌呤组。各组皆于24h后收集标本，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。采用SPSS13.0软件进行分析，均数以(±s)表示，采用单因素方差分析比较各组均数，(P0．05)无统计学意义。rn 结果：1．5mmol／l组促进内皮祖细胞增殖，与对照组相比较有统计学意义(P0．05)。3．5mmol／1)及10mmol／1组影响细胞周期的分布，10mmol／1组3-MA对细胞发生S期阻滞，G2／M细胞减少，与对照组比较(P<0．05)，5mmool组3-MAGO／G1期细胞减少、S和G2／M期增加，与对照组比较(P<0．05)。其余两组对细胞周期无明显影响。rn 结论：1．25mmol／1、2．5mmol/1组对EPCs的增殖及凋亡无明显影响，5mmol／1组对EPCs有增殖促进作用且对EPCs凋亡无明显影响，10mmol／1组抑制EPCs增殖并促进EPCs凋亡，细胞周期的重新分布可能是影响EPCs增殖的机制之一。

摘要： 本发明涉及制备无定形的9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤的方法。本发明由于采用了低成本的Me3SiCl试剂替代现有技术中的进口试剂Me3SiBr，并加入催化剂A和/或催化剂B，故9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤的合成成本大为下降。

摘要： 本发明涉及一种9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤(阿德福韦酯)晶体，其空间群为P-1，晶胞参数a＝6.020(2)，b＝11.155(4)，c＝20.833(8)，α＝93.798(6)°.β＝97.458(6)°.γ＝102.897(6)°.晶胞体积1345.5(9)3。本发明也涉及用无水乙醇和选自对9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤结晶得到所述9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤晶体的方法。本发明也涉及上述晶体在制备抗病毒药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤(阿德福韦酯)晶体，其空间群为Cc，晶胞参数：a＝13.087(5)，α＝90.00(2)°，b＝24.698(8)，β＝100.68(3)°，c＝8.319(2)，γ＝90.00(3)°，Z＝4，晶胞体积2637.6(15)3。本发明也涉及用无水乙醇对9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤结晶得到所述9-[2-[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]-乙基]腺嘌呤晶体的方法。本发明也涉及上述晶体在制备抗病毒药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种以多步合成的方式由6,10,14‑三甲基十五碳‑5,9,13‑三烯‑2‑酮的(5E,9E)‑、(5E,9Z)‑、(5Z,9E)‑和(5Z,9Z)‑异构体的混合物或6,10,14‑三甲基十五碳‑5,9‑二烯‑2‑酮的(5E,9E)‑、(5E,9Z)‑、(5Z,9E)‑和(5Z,9Z)‑异构体的混合物制备(6R,10R)‑6,10,14‑三甲基十五烷‑2‑酮的方法。所述方法是非常有利的，因为其以有效的方式由起始产物的立体异构体混合物形成期望的手性产物。

摘要： 本发明公开了一种通过偏三甲苯氧化制备2,3,5-三甲基氢醌中间体2,3,5-三甲基苯醌的方法，包括将偏三甲苯、催化剂、溶剂石油醚混合，滴加氧化剂H

摘要： 本发明涉及制备无定型的9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤的方法。本发明由于采用了低成本的Me3SiCl试剂替代现有技术中的进口试剂Me3SiBr，并加入催化剂A和/或催化剂B，故9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤的合成成本大为下降。

摘要： 本发明涉及一种9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤(阿德福韦酯)晶体，其空间群为Cc，晶胞参数：a=13.087(5)，α=90.00(2)°，b=24.698(8)，β=100.68(3)°，c=8.319(2)，γ=90.00(3)°′Z=4，晶胞体积2637.6(15)3。本发明也涉及用无水乙醇对9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤结晶得到所述9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤晶体的方法。本发明也涉及上述晶体在制备抗病毒药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤(阿德福韦酯)晶体，其空间群为P－1，晶胞参数a=6.020(2)，b=11.155(4)，c=20.833(8)，α=93.798(6)°.β=97.458(6)°.γ=102.897(6)°.晶胞体积1345.5(9)3。本发明也涉及用无水乙醇和选自对9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤结晶得到所述9－[2－[[[双(三甲基乙酰氧)甲基]氧磷基]甲氧基]－乙基]腺嘌呤晶体的方法。本发明也涉及上述晶体在制备抗病毒药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种以多步合成的方式由6,10,14-三甲基十五碳-5,9,13-三烯-2-酮的(5E,9E)-、(5E,9Z)-、(5Z,9E)-和(5Z,9Z)-异构体的混合物或6,10,14-三甲基十五碳-5,9-二烯-2-酮的(5E,9E)-、(5E,9Z)-、(5Z,9E)-和(5Z,9Z)-异构体的混合物制备(6R,10R)-6,10,14-三甲基十五烷-2-酮的方法。所述方法是非常有利的，因为其以有效的方式由起始产物的立体异构体混合物形成期望的手性产物。

摘要： 本发明公开了一种通过偏三甲苯氧化制备2,3,5-三甲基氢醌中间体2,3,5-三甲基苯醌的方法，包括将偏三甲苯、催化剂、溶剂石油醚混合，滴加氧化剂H