gp10基因的原核表达及其联合异烟肼的体外抗结核菌活性

摘要

目的:原核表达分枝杆菌噬菌体D29内溶素gp10蛋白,检测其单用及与异烟肼联合对体外结核菌的抗菌活性.方法:采用PCR法从分枝杆菌噬菌体D29基因组中扩增gp10基因,克隆至原核表达载体pET32a(+),经双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中表达目的蛋白.采用微量刃天青显色法测定gp10蛋白对结核分枝杆菌(MTB)标准株H37 Rv和临床分离耐多药株的最低抑菌浓度(MIC),同时观察其与异烟肼联用对H37 Rv的部分抑菌浓度指数(FICI).结果:PCR扩增获得长1 479 bp的gp10基因,重组质粒pET32a(+)-gp10经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切获得长约5 900和1 479 bp的条带,gp10基因测序结果与GenBank中基因序列一致,并表达相对分子质量约75 200的目的蛋白.重组蛋白gp10对MTBH37 Rv和临床分离耐多药株的MIC为256mg·L-1,其与异烟肼联用对H37Rv的FICI为0.5.结论:成功表达重组蛋白gp10,gp10对体外MTB H37Rv和临床耐多药株均表现出良好抗菌活性,其与异烟肼联用对体外H37Rv表现出协同效应.