SARS病毒核蛋白基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的高效表达

摘要

对SARS病毒核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.根据GenBank中已发表的SARS全基因组序列,设计合成了1对特异性引物,对SARS病毒N蛋白基因进行了RT-PCR扩增.将PCR产物纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-N,进行核苷酸序列测定.结果该基因全长1269bp,编码422个氨基酸.与Tor2、Urbani和TW1株相比,核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性均为100%.将pGEM-N双酶切,回收目的基因片段并克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,构建了重组质粒pET-N;将其转化表达菌BL21(DE3)用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE结果表明:重组菌可表达相对分子量约为53 kD的蛋白.Western-biotting证实,重组N蛋白可以与SARS免疫血清发生特异性反应.经凝胶薄层扫描分析,重组N蛋白表达量约占菌体蛋白的43%.