狂犬病病毒核蛋白基因的克隆序列分析及其在E.coli中的高效表达

摘要

对狂犬病病毒(RV)ERA株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列分析.根据GenBank中已发表的RV N基因序列,设计合成了1对特异性引物,对RV ERA株N基因进行了RT-PCR扩增.将PCR产物纯化后与pMD18-T连接得到重组质粒pMD-N,并进行核苷酸序列测定.结果该基因全长1 353 bp,编码450个氨基酸.RV ERA株与CVS-11、PV-11、SRV9和SAD-B19株相比,核苷酸的同源性分别为98%、98.3%、99%、99.6%,推导的氨基酸的同源性分别为98%、99%、99%、99.6%.将pMD-N双酶切,回收目的基因片段并克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N;将其转化表达菌BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达.结果重组菌裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为53 kDa的重组蛋白,经凝胶薄层扫描分析,重组蛋白表达量占菌体蛋白的56.8%,Western-blot结果显示该重组蛋白能与RV多克隆抗体发生特异性反应.