人PBM C中IL-18基因的克隆及在E.coli中的高效表达与纯化

摘要

从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中分别克隆了前体和成熟人白细胞介素－１８（ｈＩＬ－１８）的基因，并应用大肠杆菌表达系统（ｐＱＥ－３０），成功地表达了重组ｈＩＬ－１８的前体和成熟蛋白。从人ＰＢＭＣ中提取总ＲＮＡ，用ｐｏｌｙ（Ｔ）８－１２反转录成ｃＤＮＡ，再以ＰＣＲ扩增出特异ＤＮＡ 片段。利用Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体ｐＱＥ－３０，构建分别表达ｈＩＬ－１８前体和成熟蛋白的的重组质粒ｐＱＥＩＬ１８ｐ 和ｐＱＥＩＬ１８ｍ ，转化Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５后，经ＩＰＴＧ诱导，表达出相对分子质量分别为２４ＫＤ和１９ＫＤ的重组蛋白，表达量占菌体蛋白的３０％ 和３５％ 。序列测定证实，ｈＩＬ－１８前体蛋白基因长５８２ｂｐ，成熟蛋白基因长４７７ｂｐ。经金属螯合层析纯化，获得了高纯度的表达蛋白。生物学活性鉴定，重组成熟蛋白能显著刺激Ｃｏｎ