桤叶唐棣茎尖小滴玻璃化超低温保存体系优化

摘要

以桤叶唐棣(Amelanchier alnifolia)组培苗为材料,对其茎尖小滴玻璃化超低温保存方法的影响因素进行研究,并用11份桤叶唐棣种质资源验证了所建立的超低温保存规程的广谱性。结果表明:从苗龄30 d的组培苗上剪取带顶芽的茎段(长约0.5 cm),用继代培养基(MS+1.0 mg/L 6-BA+35 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,SSM)低温炼苗14 d(4℃,黑暗),将剥取的茎尖(长1.5~2 mm)依次在预培养基(MS+0.3 mol/L蔗糖+7 g/L琼脂)预培养1 d[(25±2)℃,黑暗],在室温下用加载液(MS+2.0 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)处理20 min,在0℃用植物玻璃化溶液PVS2(MS+300 g/L甘油+150 g/L乙二醇+150 g/L二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)处理40 min,转至铝箔条上由PVS2溶液制成的4.5μL小滴(0℃)中,并迅速浸入液氮10 min,装入冷冻管后在液氮中保存1 h。从液氮中取出的材料立即在卸载液(MS+1.2 mol/L蔗糖)中解冻和卸载20 min(室温),茎尖转至SSM上暗培养3 d[(25±2)℃,黑暗],之后在正常温光条件下再生培养,获得最高的存活率和再生率分别为71.67%和68.33%,11份种质资源的平均再生率为50.92%。该研究首次报道了桤叶唐棣种质资源的小滴玻璃化超低温保存规程。