内蒙古包头市1例绵羊肺腺瘤病的诊断与病毒env基因分析

摘要

绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、进行性、接触性绵羊肺肿瘤疾病。本研究通过尸体剖检、病理组织学、PCR、免疫组织化学和蛋白免疫印迹等方法确诊了1例绵羊肺腺瘤病,用病毒env基因测序结果进行基因结构和遗传进化分析。病理诊断结果显示,尸体剖检见肺肿大且质地坚实,肺表面有大量白色结节,肺叶上有数个有光泽的实变区,肺切面可见大面积实变区;光镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增生明显,呈立方状或柱状生长形成典型的“菜花样”腺瘤灶,肺泡腔内可见巨噬细胞。在病原(JSRV)的env和U3区分别设计两对引物的PCR检测结果显示,所扩增的目的条带大小与预期扩增片段大小一致,同时序列分析结果显示JSRV env与本实验室上传至GenBank中的参考序列JQ837489同源性为97.7%,JSRV env与JQ837489和新疆株KP691837聚为一支,亲缘关系较近;采用本实验室制备的JSRV的囊膜蛋白(Env)的多克隆抗体为一抗进行免疫组织化学检测,结果显示在增生的肺泡Ⅱ型上皮细胞中出现棕黄色深染的阳性信号;蛋白免疫印迹实验检测肺组织中JSRV Env相对表达量的结果显示,在80 kDa处表达特异性条带。研究结果表明,内蒙古包头地区已存在JSRV感染病例,这为今后OPA的诊断提供参考依据。