Lv-shRNA-Hsa-microRNA-691慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要

目的 构建Lv-shRNA-hsa-microRNA-691慢病毒表达载体.方法 PCR扩增pri-miR-691-2前体序列,克隆至plenti-GFP慢病毒表达载体;双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测.构建成功后感染人胰腺癌细胞Panc-1,48h后Real-time Q-PCR检测miR-691的表达.结果 酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×109TU/mL,病毒感染48h后的Panc-1胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光,Real-time Q-PCR显示被感染细胞的miR-691表达量较未感染细胞显著增高.结论 建立了高效稳定表达Lv-shRNA-hsa-miR-691的慢病毒转染系统.