VASP基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要

目的 构建靶向血管扩张刺激磷蛋白(VASP)基因RNA干扰慢病毒表达载体.方法 将前期构建的pcD-NA6.2-miRVASP进行测序鉴定,筛选阳性克隆.通过Gateway技术中的BP反应及LR反应,将携带miRVASP的表达框克隆至慢病毒目的载体pLenti6/V5-DEST,构建靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体pLenti6/V5-miRVASP;接着将其与慢病毒包装混合物共转染293FT细胞,收集病毒颗粒,侵染胃癌BGC-823细胞.结果 慢病毒表达载体测序结果表明,构建的载体与预期完全一致.用收集的携带miRVASP表达框的慢病毒颗粒侵染BGC-823细胞,荧光显微镜下可见多量细胞表达强绿色荧光,证明包装产生的慢病毒颗粒能侵染BGC-823细胞.结论 成功构建了靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体,并包装产生慢病毒颗粒原液,成功侵染BGC-823细胞,为进一步在体内实验中研究VASP在胃癌侵袭转移中的作用奠定了基础.